Наблюдение врачей на протяжении многих лет показывают, что белок Rh на организм и его здоровье оказывает определенное влияние, придавая отдельные дополнительные свойства. Иначе говоря, люди с отрицательным резусом физиологически несколько отличаются от тех, у кого этот параметр положительный. Он передается от родителей и не меняется всю жизнь.

Что такое резус фактор

Это показатель крови, отражающий присутствие либо отсутствие красных клеток белка Rh. Он имеется в эритроцитах в основном у всех людей. Однако приблизительно у 15% этого особого белка нет. Показатель совершенно не влияет на качество либо количество биологического материала – кровь. Больному с отрицательным резусом можно переливать кровь только с таким же резусом. В противном случае при попадании положительного белка, начинается выработка антител, здоровье человека будет в опасности. А переливать больному с положительным резусом кровь с отрицательным резусом допускается.

Если у отца Rh «+», матери Rh «–», а у плода резус как у папы, кровь беременной мамы воспринимает плод как инородное тело. В результате резус конфликта, здоровью малыша грозят серьезные проблемы. Может случиться даже выкидыш.

В разрешении данной ситуации современная медицина продвинулась далеко. Если резусы не совпадают, беременная должна сдавать кровь каждый месяц. Это позволит узнать наличие антител. При их обнаружении будет назначена специальная терапия.

Для определения резус фактора крови проводят определенные исследования.

Особенности подготовки

Процедура не отличается от забора биологического материала для проведения общего анализа. Медсестра набирает в пробирку небольшое количество крови из вены, после этого ее запечатывают и маркируют. При взятии образца пациент почти не ощущает боли. На процедуру уходит несколько минут. Перед исследованием не нужно соблюдать строгий режим, однако есть некоторые исключения.

Внимание!

Сдавать кровь можно после того, как пройдет 4 часа после употребления пищи.

Если человек принимает лекарственные препараты, необходимо сообщить врачу. Есть медикаменты, которые влияют на результат.

Способы определения

Существуют лабораторные и клинические методы. Они различаются совершенствованием, наличием оборудования, специально предназначенного для этих целей, и временем, за которое необходимо сделать исследование. Для определения резус фактора могут использовать разные способы:

• при помощи цоликлонов;
• экспресс-метод в пробирках без подогрева;
• на чашках Петри;
• с помощью желатина.

Почти все современные лабораторные тесты дают 100%-нвй результат. На достоверность могут повлиять несоответствующие условия, в которых проводится процедура.

А именно если в неисправном состоянии будет термостат либо в то место, где происходит химическое взаимодействие, попадут посторонние химические реагенты.

От квалификации лаборанта, выполняющего процедуру, и чистоты лаборатории зависит точность исследования.

Экспресс-метод

Резус определяется экспресс-методом, при котором используют универсальную для всех групп крови сыворотку, имеющую название антирезус. Кровь берут из пальца, затем на дно пробирки капают 1 каплю необходимой сыворотки и столько же исследуемого биоматериала. Осторожно перемешивают, спустя 3 минуты туда добавляют 2 мл физраствора. 3 раза аккуратно переворачивают. И начинают читать полученный результат. Если происходит агглютинация – Rh положительный, если она наблюдается – положительный.

Чашки Петри

Для того чтобы определить резус данным способом, потребуются:

• чашки Петри;
• изотонический раствор натрия хлорида;
• пипетки;
• стандартные сыворотки для каждой группы крови.

Лаборант капает в 3 ряда рядом по 2 капли реагента 2-х серий, в каждую добавляет каплю крови, взятую для исследования, а также контрольные отрицательные и положительные эритроциты. Осторожно смешивает, и отправляет на водяную баню на 10 минут.

Результат зависит от того, есть или нет хлопьев, которые создают слипшиеся эритроциты. Если склеивания не случилось, то определяемый биоматериал имеет отрицательный резус, при произошедшем слипании можно говорить о положительном факторе Rh.

Цоликлоны

Узнать резус можно, используя цоликлоны, которые относятся к моноклональным реагентам. Определение происходит в процессе реакции агглютинации, когда в присутствии электролита под воздействием антител склеиваются и выпадают в осадок различные клетки, в том числе и эритроциты. Процедуру выполняют в хорошо освещенной комнате. Для того, чтобы провести тест понадобится цельная кровь, отмытые эритроциты либо те, которые присутствуют в консерванте, плазме, сыворотке.

Более достоверный результат можно получить, используя эритроциты высокой концентрации. Для реакции берут пластину, подогретую до 37 градусов. На нее капают с помощью пипетки примерно 0,1 мл реагента, рядом с ним 0,01 мл. эритроцитов либо крови.

Стеклянной палочкой эти 2 компонента аккуратно перемешивают, покачивая каждые полминуты тарелку, лаборант зрительно наблюдает за реакцией. Она начинается спустя четверть часа, в активную фазу входит через минуту, однако результат принимают в расчет лишь через 3 минуты.

Если эритроциты не выпадают в осадок – резус отрицательный, склеивание и выпадение красных клеток в виде хлопьев свидетельствует о положительном резусе. Реакция видна невооруженным глазом.

Желатин

Чтобы определить резус-фактор, нередко прибегают к использованию желатинового экспресс-метода.

При процедуре к крови добавляют 10 % раствор желатина в количестве 1 капли, пробирку помещают на 10 минут в благоприятные условия с температурой в 37 градусов, добавляют теплый изотонический раствор хлорида натрия. Содержимое осторожно перемешивают.

Желатин относится к веществам, которые помогают исчезновению неспецифической реакции эритроцитов. В экстренных ситуациях можно применять любой из методов определения резус фактора.

Внимание!

Перед переливанием крови обязательно должны быть проведены пробы на совместимость.

Процедуру выполняют даже, если имеются данные о том, что группы крови больного и донора идентичны.

Расшифровка результатов

Взятие анализа по определению резуса занимает мало времени, выполняется довольно быстро. Его результат указывают на первом листе истории болезни, у доноров данные могут быть внесены в паспорт. Если положительный Rh не требует внимательного отношения, то с отрицательным надо быть более внимательным. При попадании в больницу для проведения операции либо при необходимости переливать кровь, обязательно надо сообщать о нем врачу. В основном перед хирургическим вмешательством медики проводят контрольный анализ, при не совпадении с имеющимися результатами, его проводят еще раз.

Каждый человек должен знать свою группу крови и резус-фактор, поскольку может пригодиться в любой момент. Особенно это касается женщин, которые планируют родить ребенка. Отсутствие резус-фактора – это не заболевание.

Его учитывают лишь в период беременности у женщин с отрицательным Rh. Современная медицина помогает вовремя определить резус, чтобы ребенок родился здоровым и без патологии.

Для получения правильного и достоверного результата следует обращаться в хорошую лабораторию, которая работает согласно надлежащим требованиям.

Как узнать резус-фактор крови?

Резус-фактор – один из параметров крови, который отражает присутствие или отсутствие на мембранах красных клеток особого белка Rh. В случае, если он есть, кровь резус-положительная и обозначается Rh+, при его отсутствии резус-отрицательной – Rh-.

Этот белок есть на эритроцитах большинства живущих на планете, но примерно у 15 % его нет. Его отсутствие или присутствие никак не сказывается на здоровье. Rh передается от родителей и на протяжении всей жизни остается неизменным.

Когда сдают анализ на Rh

Еще советуем:Резус-фактор и резус-конфликт

Определение резус-фактора происходит во время анализа крови на группу. Эта информация необходима при переливании, при подготовке к хирургическому вмешательству и в период вынашивания плода.

Во время беременности может произойти конфликт между кровью будущей матери и кровью ребенка. Зная о том, что женщина резус-отрицательная, врачи могут заранее предпринять меры, чтобы избежать конфликта и сохранить здоровье резус-положительного плода.

Сдать кровь на резус можно в лаборатории любой поликлиники или в стационаре. Для исследования делают забор из пальца или из вены.

Как определяют

Методов определения Rh несколько:

• На чашках Петри методом конглютинации.
• С помощью цоликлонов.
• Экспресс-методом в пробирках без подогрева.
• Желатиновым методом.

Суть анализа заключается в выявлении антигена D с помощью антирезусных сывороток или моноклональных реагентов (цоликлонов) в реакции агглютинации (склеивания эритроцитов и образования хлопьев) в пробирках или на плоскости.

Комплекс препаратов для определения Rh-принадлежности

На чашках Петри

Для определения резус-фактора понадобятся чашки Петри, индивидуальные пипетки, раствор натрия хлорида изотонический, сыворотки стандартные для всех групп крови. Порядок проведения:

1. Капают рядом по две капли реагента двух серий для трех исследований (в три ряда).
2. В каждую из серий добавляют по капле исследуемой крови и эритроцитов (контрольных положительных и контрольных отрицательных).
3. Перемешивают, на десять минут ставят чашку на водяную баню (47°C).
4. Результат определяют по наличию или отсутствию хлопьев (слипшихся эритроцитов). Если красные клетки склеились, Rh положительный, если слипания не произошло, Rh отрицательный.

Определение Rh-принадлежности цоликлонами

Чтобы узнать резус-фактор, применяют моноклональные реагенты – цоликлоны, которые получают методом генной инженерии из асцитной жидкости мышей. Rh определяется во время реакции агглютинации, которая происходит на плоскости.

Процедура должна проводиться в помещении с хорошим освещением. Для теста берут цельную кровь, эритроциты, находящиеся в сыворотке, плазме, физрастворе или консерванте, или отмытые эритроциты. Для получения лучшего результата нужны эритроциты высокой концентрации, а пластинка, на которой будет происходить реакция, подогревается до 37°C.

Алгоритм действий:

1. На планшет индивидуальной пипеткой капают большую каплю реагента (примерное количество – 0,1 мл).
2. Около реагента капают исследуемую кровь (маленькую каплю) или эритроциты в количестве 0,01 мл.
3. С помощью стеклянной палочки как следует смешивают реагент и кровь и каждые 30 секунд тарелку покачивают в течение трех минут, наблюдая за реакцией визуально.
4. Реакция агглютинации начинается через 15 секунд, явно выраженной становится через 1 минуту, но результат учитывают только спустя три минуты.

Если началась реакция агглютинации (склеивание эритроцитов и выпадение их в осадок), кровь маркируют резус-положительной, если слипания красных клеток не наблюдается, резус-фактор отрицательный. Склеенные эритроциты, которые представляют собой хлопья, видны невооруженным глазом.

Результат трактуется в зависимости от того, произошла ли агглютинация красных клеток

Экспресс-метод

В качестве реагента применяется сыворотка под названием «антирезус», которая является универсальной для всех групп крови.

1. В пробирку помещают каплю крови (эритроцитов) в количестве 0,05 мл, затем добавляют 2 капли реагента «антирезус».
2. Пробирку поворачивают, не встряхивая, чтобы содержимое перемешалось и равномерно растеклось по стеклу.
3. Примерно через три-пять минут происходит склеивание эритроцитов.
4. Чтобы исключить агрегацию красных клеток, в пробирку добавляют раствор изотонический NaCl в количестве 2-3 мл и несколько раз переворачивают пробирку, чтобы содержимое перемешалось.
5. После этого считывают результат. Если появились хлопья на фоне более светлой жидкости, Rh положительный, если хлопьев нет, жидкость окрашена равномерно в розовый цвет, Rh – отрицательный.

Нужно сказать, что универсальные сыворотки могут дать ложноположительную реакцию с Rh-отрицательными эритроцитами.

Может произойти неспецифичное склеивание красных клеток, на поверхности которых есть другие антитела – не атирезус. Поэтому параллельно проводят тестирование с контрольным раствором усилителя.

Если после введения контрольного раствора происходит агглютинация, результат считается недостоверным, и тестирование повторяют с другим реагентом.

Пробирочный метод определения Rh

С применением желатина

Эта методика основана на применении желатина (в виде раствора 10 %). Для тестирования используются и стандартные антирезусные реагенты, и цоликлоны.

1. В пробирку капают одну каплю крови (0,05 мл) или эритроцитов в виде взвеси в сыворотке (50 %).
2. Затем 2 капли подогретого заранее до жидкого состояния раствора желатина.
3. Далее 2 капли реагента, затем смешивают.
4. Пробирку ставят на пять-десять минут на водяную баню (47°C) или на полчаса в сухой термостат с такой же температурой.
5. Затем в пробирку добавляют физиологический раствор (5-8 мл), закрывают крышкой и осторожно поворачивают два-три раза, чтобы перемешать.
6. Для определения наличия хлопьев содержимое пробирки осматривают невооруженным глазом на свет или через увеличительное стекло.

При использовании желатина не происходит неспецифической агглютинации. После проведения такой пробы необходимы контрольные тесты:

• со стандартными Rh+ эритроцитами;
• со стандартными Rh- эритроцитами;
• с исследуемой кровью (эритроцитами) и желатином.

Заключение

Информация о резус-факторе необходима в случае переливания крови. Для гемотрансфузии может быть использована только совместимая по группе и по резусу кровь. Кроме этого, следует определить резус-фактор во время беременности. Еще лучше узнать его на этапе ее планирования. Это необходимо, чтобы предотвратить резус-конфликт между Rh-положительным плодом и Rh-отрицательной женщиной.

Определение группы крови: цоликлоны, стандартные сыворотки и перекрестный способ

Определение группы крови и резус-фактора делятся на два способа:

Экспресс-диагностика (первичное определение группы крови и Rh-фактора) не учитывает антигены Келл, не говоря уже про другие системы верификации. Поэтому цоликлоны применяют только для первичного определения группы крови и резус-фактора и при экстренных показаниях трансфузии компонентов крови.

Подробнее о самой редкой группе крови в Мире можно найти здесь.

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

• Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?
• – цоликлон анти-А;
• – цоликлон анти-В;
• – цоликлон анти-D;
• – раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

 Расшифровка результатов определения группы крови

• если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
• если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
• если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
• если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

AB (IV)

Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

• если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
• если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

AB (IV)Rh-

Другими словами, при смешивании цоликлона Анти-D с резус-положительными эритроцитами наступает реакция агглютинации, а если кровь резус-отрицательная — агглютинация отсутствует (как показано на рисунке — четвертая группа крови резус-отрицательная).

Определение групп крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками — поиск и обнаружение в крови антигенов А и В с помощью реакции агглютинации. Для достижения цели используют:

• Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп крови О (I) — бесцветная, А (II) — синяя, В (III) — красная, АВ (IV) — жёлтая.
• Белые тарелки, маркированные группами крови: 0 (I), А (II), В (III), AB (IV).
• NaCl 0,9%
• Стеклянные палочки

1. Подписать тарелку (Ф.И.О. пациента);
2. Нанести обозначения двух серий стандартных сывороток I, II и III групп крови в объёме 0,1 мл, образующие два ряда по три капли слева направо: 0 (I), А (II), В (III);
3. Забрать кровь из вены. Шесть капель исследуемой крови пациента перенести стеклянной палочкой на пластину в шесть точек рядом с каплей стандартной сыворотки и перемешать.

Агглютинация начнется через 30 сек. В те капли, где произошла агглютинация, добавить по одной капле NaCl 0,9% и оценить результат.

Оценка результатов определение группы крови стандартными сыворотками

Положительная реакция агглютинации может быть пескообразной или лепестковой. При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет. Результаты реакций в каплях с сыворотками одной и той же группы (двух серий) должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками после наблюдения в течение 5 мин.

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB (IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB (IV), не содержащей агглютининов. Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0 (I), А (II) и В (III), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ (IV).

Определение группы крови перекрестным способом — обнаружение наличия или отсутствия в исследуемой крови антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Для реакции со стандартными эритроцитами необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0 (I), А (II), B (III).

Методика проведения реакции со стандартными эритроцитами

1. Кровь для исследования берут из вены в пробирку, центрифугируют или оставляют на 30 мин для получения сыворотки.

2. На маркированную тарелку наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки крови из пробирки, а рядом с ними по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.

3. Соответствующие капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией добавляют NaCl 0,9% и оценивают результат.

Оценка результатов проведения реакции со стандартными эритроцитами

Оценивают результаты, полученные со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и стандартными эритроцитами. Особенность результатов реакции со стандартными эритроцитами — эритроциты группы 0 (I) считают контрольными.

Результат перекрёстного способа считают достоверным, если при  реакции со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Если этого не происходит, обе реакции следует переделать.

Определение резус фактора экспресс методом с помощью стандартного универсального реагента без подогрева в пробирке

• Для определения резус-фактора может быть использована свежая не свернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед исследованием, или консервированная, без всякой предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после образования сгустка и отстаивания сыворотки.
• Техника определения.
• — 1мл стандартного универсального реагента (антирезусная сыворотка группы AB(IV)+33% раствор полиглюкина);
• -1мл исследуемой крови(эритроцитов)
• На дно пробирки внести 1 каплю стандартного универсального реагента и 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов).
• Содержимое пробирки перемешать встряхиванием и затем медленно поворачивать, наклоняя пробирку почти до горизонтали таким образом, чтобы содержимое растекалось по её стенкам. после 3-минутного покачивания ,

для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавить 2-3мл физиологического раствора хлористого натрия и перемешать, не взбалтывая, путём 2-3-х кратного перевёртывания пробирки. Оценку производить визуально.

1. Оценка результата.
2. Резус-(+) -наличие агглютинации в виде крупных хлопьев из эритроцитов на фоне просветлённой жидкости .
3. Резус-(-) -отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная жидкость).
4. Определение резус-фактора с помощью моноклонального реагента (цоликлон анти-d , анти-d супер).

Цоликлон анти-D супер выпускается во флаконах по 2,5 или 10 мл (1 мл содержит 10 доз). Срок хранения — 1 год в холодильнике при t 2~8 °С. Вскрытый флакон можно хранить в холодильнике в течение месяца в закрытом виде

• Наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента на пластинку или планшет.
• Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают кровь с реагентом.
• Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 сек, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 сек.
• Результаты реакции считывают через 3 мин.
• Тарелку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 сек, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации.
• Метод агглютинации на чашках Петри.
• — исследуемые эритроциты;
• -две серии стандартных сывороток антирезус всех групп системы АВО;
• -контрольные образцы резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов:
• -водяная баня с постоянной температурой 46-48 С°
• -чашки Петри

Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее — об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.

Метод агглютинации с 10% желатином:

Реакция конглютинации с желатиной обычно проводится в пробирках емкостью 8—10 мл. В штатив устанавливают 2 ряда пробирок для двух различных серий стандартной сыворотки.

В контрольные пробирки каждого ряда вводят по 1 капле стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов, в остальные пары пробирок — исследуемые эритроциты.

Исследование можно проводить как с отмытыми, так и с неотмытыми эритроцитами.

Затем в каждую пробирку добавляют по одной капле подогретой до разжижения желатины (10% раствор) и по одной капле стандартной сыворотки.

Содержимое пробирок смешивают путем встряхивания и помещают в водяную баню при t° 46—48° на 5 мин.

, по истечении которых в каждую пробирку доливают 5—8 мл подогретого до t° 46—48° физиологического раствора NaCl и рассматривают на свет, определяя наличие или отсутствие агглютинации (рис. 2).

1. Метод агглютинации в солевой среде.
2. При исследовании сывороткой, содержащей полные антитела, применяют метод агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках (высотой 2—2,5 см, диаметром 0,5 — 0,6 см).
3. В штатив устанавливают 2 ряда пробирок (по количеству исследуемых образцов и по 2 для контроля), в которые вводится по 2 капли стандартной сыворотки и по 1 капле 2% взвеси эритроцитов, предварительно дважды отмытых физиологическим раствором NaCl.
4. Содержимое пробирок встряхивают и помещают в термостат при t° 37° на 1 час.

О резус-принадлежности судят по форме осадка, который рассматривают через лупу с 5—7-кратным увеличением над источником света, закрытым матовым стеклом. Результаты учитывают в зависимости от наличия или отсутствия агглютинации в исследуемых эритроцитах после проверки контрольных образцов.

Определение резус-принадлежности крови

Раздел: Медицина › Физиология
Определение резус-принадлежности крови С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОКОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

Определение резус-принадлежности крови С ПОМОЩЬЮ СТАНДАРТНЫХ СЫВОРОТОК

Понятие резус-фактор — слишком общее (и устаревшее). Система резус антигенов многообразна. Современные методы исследования позволяют делать тесты индивидуально по резусу D, С, с, Е, е. Кроме этого, необходимо выявлять случаи со слабым D-антигеном или вариабильным D-антигеном. Вся эта информация тоже крайне важна при подборе донора в случае необходимости.

Ход работы. Определение резус-принадлежности крови проводится с помощью стандартной универсальной сыворотки «антирезус» для всех групп крови. В пробирку вводят одну каплю (0,05 мл) исследуемой  крови   или  эритроцитов   и  добавляют   1—2  капли  стандартного универсального реагента «антирезус» той же группы крови.

Перешивают    содержимое    путем    встряхивания    пробирки и помещают ее на водяную баню на 5 минут при температуре 370С, так как иммунная реакция с антигеном требует оптимальной температуры.   Как правило, агглютинация наступает в течение 3-5 мин.

  По истечении этого времени  для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2—3 мл изотонического раствора хлорида натрия и перемешивают  (но взбалтывая!), 2—3 раза переворачивая пробирку. 

В некоторых случаях не представляется возможным определение резус-принадлежности реципиента, тогда пользуются индивидуальной пробой на резус-совместимость крови донора и реципиента.

На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки крови больного и маленькую каплю переливаемой крови, их смешивают и ставят на водяную баню (42-45 °С) на 10 мин. Если наступила агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью реципиента и ее переливать нельзя.

Трактовка результатов. Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом. При положительном резуль­тате агглютинация выражается в появлении хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жидкости.

При отрицательном результате жидкость в пробирке остается равномерно окрашенной, без признаков агглю­тинации эритроцитов. Результат учитывают как истинный после проверки контрольных, образцов, т. е.

при поло­жительном результате со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, одногруппными с исследуемой кровью. 

 ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ

 Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей  – носителей анти-D и анти-С гибридом. Цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с предназначены для определения резус принадлежности крови.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом.

Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение  трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек.

, но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется, 

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов.

Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья.

При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.

Наличие агглютинации с Анти-D, Анти-С или Анти-с цоликлонами свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.

Вас могут заинтересовать другие наши публикации:

Что легко снижает риск рака головы и шеи?В «Сколково» впервые в мире напечатали на биопринтере живой органНайден способ победить рак мозгаКардиохирург-блоггер вывел детокс на чистую водуОсновные вредные привычки, которые портят зубы

Определение резус-фактора крови экспресс-методом

Резус-агглютиноген (Rh-фактор) крови не имеет в плазме врожденных агглютининов, однако может являться причиной несовместимости крови при повторном ее переливании.

Для работы необходимо: то же, что и для предыдущей работы  и стандартная антирезус сыворотка и контрольная сыворотка (не содержащая антирезус антител).

Ход работы:На тарелку наносят по одной капле контрольной сыворотки (справа –К) и стандартной антирезус сыворотки (слева – Rh). Рядом с каждой сывороткой помещают по одной капле исследуемой крови.

Последующие манипуляции должны начинаться с контрольной сыворотки, но не наоборот (в противном случае пользоваться одним концом палочки нельзя).

Стеклянной палочкой перемешивают каплю крови с каплей сыворотки (контрольной), образуя общую каплю диаметром около 1-1,5 см. Затем таким же образом перемешивают кровь с антирезус сывороткой. Покачивая тарелку, наблюдают за реакцией.

Для лучшего выявления наличия или отсутствия агглютинации можно добавить в обе пробы по капле физиологического раствора.

Если исследуемая кровь резус-положительная, то в пробе со стандартной антирезус сывороткой будет агглютинация эритроцитов (в контроле ее быть не должно). Если кровь резус-отрицательная, агглютинация отсутствует в обеих пробах.

При возникновении агглютинации в пробе с контрольной сывороткой определение следует повторить, либо проводить другими методами.

Рекомендации к оформлению работы:Определить и записать резус принадлежность испытуемой крови. Объяснить значение резус-фактора при переливании крови.

РАБОТА 7. Наблюдение гемолиза эритроцитов. Осмотическая резистентность эритроцитов.

Гемолизом называется выход гемоглобина в раствор, обусловленный повреждением оболочек эритроцитов. При этом кровь становится прозрачной, «лаковой». Различают несколько видов гемолиза: осмотический, механический, химический, термический, биологический.

       Осмотический гемолиз, происходящий в гипотоническом растворе, объясняется тем, что вода, проникая в эритроциты, в конечном итоге приводит к разрыву их оболочек. Механический гемолиз наблюдается при длительных механических воздействиях на кровь (встряхивание, сдавливание).

Химический гемолиз наступает в результате растворения белковой или липоидной части оболочки эритроцитов щелочами, спиртом, бензином, эфиром и т. д.

Термический гемолиз, наступающий при промораживании крови, в сущности сводится к механическому повреждению эритроцитов образующимися в них кристалликами льда.

Биологический гемолиз наступает под влиянием специфических гемолизинов растительного (сапонины) или животного происхождения (яды пчел, змей, бактерийные токсины, а также гемолизины крови, вызывающие гемолиз при переливании несовместимой по групповой принадлежности крови и др.).

Цель:наблюдение осмотического, химического гемолиза эритроцитов. Определение осмотической резистентности (стойкости) эритроцитов.

Воспроизведение гемолиза

Для работы необходимо: пробирки, пипетки вместимостью 1 мл, раствор хлорида натрия, капиллярная пипетка от гемометра, дефибринированная кровь, дистиллированная вода, нашатырный спирт,  2 % раствор сапонина.

Ход работы: Четыре пробирки ставят в штатив и в первую наливают 2 мл физиологического раствора, во вторую – 2 мл физиологического раствора и 5 капель нашатырного спирта, в третью – 2 мл дистиллированной воды, в четвертую – 2 мл 2 % раствора сапонина. Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли крови и встряхивают пробирки, перемешивая содержимое. Через 30 минут наблюдают результаты. При наличии гемолиза раствор в пробирке становится прозрачным.

Рекомендации к оформлению работы: Сделать вывод, дав оценку полученным результатам. В каких пробирках произошел гемолиз, каков механизм?

Определение осмотической резистентности эритроцитов

Для работы необходимо: пробирки, пипетки вместимостью 1 мл, 1 % раствор хлорида натрия, капиллярная пипетка от гемометра, дефибринированная кровь, дистиллированная вода.

Ход работы:Разлить в 10 пробирок, помещенных в штатив. Раствор хлорида натрия в постепенно убывающем количестве – с 0,6 до 0,15 мл. Затем в каждую из пробирок добавить до 1 мл дистиллированной воды и таким образом получить растворы хлорида натрия в убывающей концентрации, начиная с 0,6 % до 0,15 %.

Затем в каждую пробирку добавить по капле крови (кровь выпускать на стенку пробирки). Пробирки встряхнуть и оставить стоять при комнатной температуре. Через 1 час обнаруживают, что в ряде пробирок эритроциты постепенно осели, а над ними – обесцвеченный слой жидкости.

Отметить концентрацию хлорида натрия в той пробирке, в которой хотя и есть осадок эритроцитов, но слой жидкости над ними чуть-чуть окрашен, что указывает на частичный гемолиз. Эта концентрация хлорида натрия и будет границей минимальной резистентности эритроцитов.

Границу максимальной резистентности определяют по концентрации раствора хлорида натрия в той пробирке, в которой уже нет осадка, и жидкость интенсивно окрашена. Через некоторое время в пробирках с гемолизированной кровью может образоваться небольшой неокрашенный осадок, состоящий из стромы эритроцитов, не содержащих Hb.

Примечание: У здорового человека максимальная резистентность эритроцитов колеблется в пределах от 0,28 до 0,32, а минимальная – от 0,52 до 0,48 (числа обозначают процент содержания хлорида натрия в растворе).

Рекомендации к оформлению работы:Результаты опыта запишите в тетрадь. Каково клиническое значение ОРЭ.

Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 402;